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科研体系

坚持创新驱动于人生探索、动物测试技木的多层面的开发

蛋白表达概述

蛋白表达(protein expression)即重组蛋白表达是指通过将目的基因重组克隆到人工载体(vector)上,再导入受体细胞或无细胞体系,在异源系统表达为蛋白的技术。
蛋白表达可以解决天然蛋白难以获得的问题。在上世纪七十年代首次创建异源基因的蛋白表达后,迄今已有数以万计的重组蛋白成功表达,有力推动了生物技术的快速发展和生物医学研究与产业的进步。

目的

通过蛋白表达,首先可以获取难以从天然来源获得的蛋白。
其次,蛋白表达产物批量大纯度高,不仅有利于对目的蛋白的分析,而且可以大幅度降低成本。
更为重要的是,通常选用的重组蛋白表达宿主细胞生物安全性高,从而避免了一些病原宿主存在的潜在生物安全风险。

方法

还包括还包括什么是基因场面克隆、拷贝到表答标准体系、成脂表答及物品纯化及定性分析等步骤。

分类

蛋白的表达系统一般可以分为:
1、原核表达系统:大肠杆菌是最为常用的蛋白表达体系,具有遗传背景清楚、易于繁殖、成本低、表达量高等优点,但缺乏翻译后修饰机制,不适用于需要糖基化或者特定位点切割等修饰的蛋白表达,因此适合于相对分子量小于100k且翻译后修饰不影响结构和功能的蛋白表达。枯草芽孢杆菌也可用于蛋白表达,其优点是具有较强的分泌表达能力和较低的蛋白酶活性等,也逐渐受到关注。
2、真核表达系统:可以实现不同程度的糖基化等翻译后修饰,更接近于来自真核蛋白的天然活性。主要包括 ① 酵母表达系统(常用毕赤酵母、酿酒酵母等),酵母可高密度发酵又可以进行翻译后修饰 ,兼具了原核和真核宿主细胞的优点,也是一种良好的蛋白表达系统。② 昆虫细胞表达系统:外源基因通过杆状病毒载体转染昆虫细胞进行表达,是一种真核蛋白的高表达体系,适合于一些在原核体系难以表达的蛋白,比如膜蛋白、大分子质量蛋白、蛋白激酶等。③ 哺乳动物细胞表达系统:哺乳动物细胞的翻译修饰效率远高于酵母、昆虫细胞体系等,结构和功能更接近于天然真核蛋白,但表达量低、成本高。
3、无细胞表达体系:可以从质粒和PCR产物直接表达目的蛋白,表达体系是无细胞提取物,来自于大肠杆菌、麦胚、兔网织红细胞等。无细胞蛋白表达优点是可表达其它系统难以表达的产物、高通量、可自动化,但表达量低、成本高昂。

  • 技术特点

    目前已成功建立了原核表达体系、昆虫细胞表达体系,并合作建立了哺乳动物CHO细胞的蛋白表达体系、无细胞表达体系,通过这些体系成功表达了多种目的蛋白。 我公司现具有独特的包涵体蛋白复性技术和原核蛋白分泌表达体系。此外,还建立了氨基酸密码子同义突变工艺,可以根据宿主细胞密码子使用特征,对目的基因密码子进行优化,可有效提高异源基因的表达效率和活性。

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